爱诺美康

出国就医 细胞扩增中会不会受病毒污染

基于复制缺陷型HSV-1的载体，一般分为辅助细胞依赖型和辅助细胞非依赖型两种；辅助细胞依赖型载体也被命名为扩增子（amplicons），其扩增子是存在缺陷的HSV基因组，由自然重组产生。出国就医服务机构爱诺美康了解到，在高感染复数条件下，可通过连续传代进行扩增。

缺陷型基因组（扩增子）至少含有一段终止序列、和一段病毒合成所需的起始序列，其病毒DNA合成的起始需要扩增扩增子，剪切连环体DNA和包装扩增子。出国就医服务机构爱诺美康了解到，由于扩增子缺少主要编码病毒结构蛋白的序列，因此必须由某种辅助病毒、提供病毒结构蛋白，以及参与病毒DNA复制和出胞核所需的蛋白。

通过删除关键的HSV-1基因cx4，可构建一种辅助病毒。出国就医服务机构爱诺美康了解到，在该系统中，表达的细胞系和扩增子共转染，随后使用M删除的HSV-1进行感染；其扩增子的长度通常不足15kb，从理论上来说，扩增子可以容纳长达150kb（HSV-l基因组长度）的序列。

出国就医服务机构爱诺美康了解到，由于扩增子不存在病毒基因表达停止的基因，因此扩增子能在相对较长的时间内、有效表达整合的转基因。出国就医服务机构爱诺美康了解到，尽管扩增子存在上述优点，仍存在某些不足之处：扩增子需要辅助病毒编码缺失的病毒蛋白，因此扩增子易受到辅助病毒DNA的污染。

通过产生不具备包装功能的辅助细胞，能部分解决该问题。出国就医服务机构爱诺美康了解到，扩增子的产量低于野生型病毒数个数量级，所以复制子和辅助细胞的比率较低；之后的选择性优势，会产生更小的复制子，导致复制子在连续传代后会不稳定。

出国就医服务机构爱诺美康了解到，在某些环境下，辅助细胞非依赖型HSV-1病毒载体，会删除比较关键的病毒基因。由于1个或多个关键基因被删除，这些病毒需在具有互补其缺陷的细胞系中生长。