出国治疗 引物的延伸需要调整温度和时间
发布日期：2018-02-28通常，PCR所需要的循环数和起始目的DNA拷贝数成反比。例如，起始浓度为105的模板分子，需要25个循环才能在凝胶电泳中，经溴化乙锭作用显出条带。拷贝数低的目的DMA，需要更多的循环数。出国治疗后如果起始时DNA拷贝数为2，鉴于目的DNA在每个PCR循环后将翻倍，那么理论上在n个循环后PCR扩增产物将会扩大很多。
然而经过25个循环，PCR扩增产物将进入平台期，这是因为反应成分（大部分为dNTP）的消耗导致反应速度减慢。此外，热变性导致的DNA聚合酶效率稳步下降也是一个原因。出国治疗后引物延伸步骤，需要调整温度和延伸时间。延伸温度由所使用的DNA聚合酶佳功能温度决定，而延伸时间由目的DNA序列的长度决定。
例如，使用Taq DNA聚合酶，经典的延伸温度是72°C，延伸时间为1分钟时，可得到长达2kb的产物。PCR试剂因为使用了目标特异性引物，所以，与其他核酸 分析方法相比，PCR的主要优点之一为具有高度特异性。出国治疗服务机构爱诺美康介绍到，两条单链引物分别结合到所需要的双链目的DNA序列，引物（通常被定义为上游引物和下游引物）与变性的单链DNA互补结合。
设计引物时，要掌握目的DNA序列相关的知识。出国治疗设计理想的引物，需注意以下几个原则：第一，引物应具有特异性，其只能与目的DNA序列结合，以尽量减少非特异性扩增的机会。第二，引物自身或引物之间不应存在互补序列，以防止引物二聚体形成。第三，应该加入比目的DNA摩尔浓度更多的引物，因为引物在每个循环中都会被消耗。
后，优化退火温度对于特异性来说是很有必要的，因为温度太低容易产生非特异性结合，而温度太高会导致退火失败。退火温度是由引物的解链温度决定的，出国治疗后可让医疗中心设计引物，并计算每条引物的退火温度。
出国治疗服务机构爱诺美康介绍到，PCR的稳健性，来自于它具有扩增不同来源DNA的能力。如来源于组织、外周血或其他材料。组织可以是新鲜的、冷冻的或是经甲醛固定的。此外，核酸可以是RNA、基因组DNA，或者是线粒体DNA。事实上，PCR是如此强大，甚至能将来源于甲醛固定的石蜡包埋组织中的片段DNA，在纳克水平上进行有效地扩增。
