出国就医 临床标本确认用于完成检测验证
发布日期：2018-02-27经研究发现，在检测肿瘤细胞突变时，合适的阴性对照是从被确定未患肿瘤的个体，取到的正常组织肿瘤的个体。出国就医服务机构爱诺美康介绍到，这些组织经经验丰富的病理医生，确认没有肿瘤细胞，并且已经用第二种分子学检测方法证实是阴性。
某些情况下，为谨慎起见可设置多个阴性对照，以确保检测是正确的。在使用其他肿瘤或癌旁正常组织，做对照时也存在一些陷阱，包括存在用欠敏感方法未检测到的突变；少量突变阳性的肿瘤细胞浸润到周围正常组织中；肿瘤突变的异质性；染色体重排等其他遗传变异。出国就医后所有这些因素，将导致确定阴性的Ct值（即阴性阈值）为升高，增加报告假阴性的风险。
已知阴性样本的检测，对于证实分析方法的特异性也很重要。qPCR过程中少量非特异性扩增，也会导致报告假阳性结果的风险增加。出国就医的检测整体的敏感性，应该采用真实世界的临床标本（如FFPE或冰冻组织），来进行经验性的确认，以此来完成检测方法的验证。检测DNA变体或特异转录本的探针，是可以商业化购买的。并且可以提供一个敏感性的水平，但其可能只是理论上的，可能并没有经过常规临床诊断实验室中，所检测的相似材料所确认。
因此，非常有必要用标准接收的样 本进行敏感性的确认。qPCR检测时设置几种对照至关重要，应用内部扩增对照可以确保样品，有足够的量用以检测。突变检测时，同时检测该基因的野生型等位基因（WT），和一个在所有组织中都表达的管家基因。出国就医后，阳性对照设置的目的是为了确保阴性结果，不是由于样本质量差或是由于定量造成样本量减少，或是人为误差等原因。因为qPCK敏感性高，每次检测都用WT对照，是为了证实没有交叉污染造成的假阳性。
而不含核酸的空白对照的设置则有助于排除污染，避免假阳性。定量检测MqPCR是检测临床样品中，特定HNA转录本的表达水平，和突变负荷的“金标准”方法。由于定量qPCR的可重复性和敏感性，使其可用来检测低突变负荷和微小残留灶。为确保出国就医后该检测方法的准确性和可重复性，需要制定相应的检测及质量标准。
在设计定量qPCR检测时，需要确定探针的效能。可以通过梯度稀释拷贝数已知的样品，并确定每个稀释液的Ct来实现，这可以利用细胞系或是人工合成的阳性对照。出国就医应用这些对照来确定探针检测的上、下限也很重要。
