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出国看病 样品检测异常时应警惕是否污染

通常，检测RNA样品质量的方法是利用qPCR技术，直接检测已知在所有标本中表达的管家基因，如p-tubulin和某些核糖体蛋白。出国看病应用qPCR法评估RNA质量时，必须先确定Ct值阈值以避免处理低质量标本而导致报告错误。

当进行基因芯片检测分析时，在报告结果之前需要评估每一批检测的质量。大多数商业化的基因芯片检测平台，都设有用于检测整个检测平台性能的内对照。出国看病的内对照探针，应包括评价背景的阴性对照探针，评价结合特异性的错配探针，评价寡核苷酸退火的不同解链温度的探针，和评价整体性能的阳性/管家基因对照探针。此外，如果用正常参照样本做相对基因表达分析，在发出报告之前，需由一位经验丰富的肿瘤学/病理学家确认参照样本是正常的，这一点至关重要。

用aCGH检测基因拷贝数的增加和缺失后，验证实验好米用pish法。但这也存在一个问题，为检测基因组特异性区域设计的FISH探针，也有可能是无效的，或由于插入/缺失/复制的基因片段，太短无法用F7SH法检测到。出国看病后，至少染液交换是应该做的，也就是将患者的标本和参照物，用与初分析相反的荧光进行标记。

二代测序是一个功能强大的检测工具，它能让用户在短期内获得大量测序数据。NGS利用通用引物选择性扩增，固定于磁珠或玻璃芯片上的靶DNA进而获取测序数据。将产生的测序数据与参考序列做比对，进而检测出出国看病患者样品中，可能存在的任何异常（突变、易位、异常转录）。由于NGS极易受到污染，在进行NGS检测时，实验室应格外警惕样本污染。

关于这一点，在公共数据库中，有超过20%非灵长类物种的基因序列中含有人类的序列，这很可能是由于污染造成的。NGS平台具有极高的敏感性，NGS平台的敏感性主要取决于测序覆盖的深度，或特定核苷酸测序的次数。出国看病若要增加NGS平台测序的深度，能增加测试的敏感性，但同时却会降低测序的特异性。

因此，测序的深度根据NGS检测所需的敏感性来调整。例如检测遗传突变时，测序深度足以检测出由50%等位基因构成的基因突变。出国看病服务机构爱诺美康介绍到，然而当采用1NGS检测，只存在于5%的等位基闵的体细胞突变时，这就需要更高的测序深度，以验证整个检测平台的性能。