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去美国看病 蛋白质可使用重肽段作为标准

经研究介绍，基于质谱的蛋白组学通常包括自上而下和自下而上两种方式。自上而下蛋白组学检测完整的蛋白或多肽，其不使用蛋白水解酶，并保留了整个分子的完整结构信息。自下而上的蛋内组学更多使用蛋白水解酶，如可剪切精氨酸和赖氨酸残基末端的胰蛋白酶消化为多肽片段。去美国看病后，这些肽段随后由液相色谱（LC）分离，并使用串联质谱（MS/MS）分析。

质谱分析获取的前体和产物，与每种多肽理论上的前体和产物进行比对，这些理论上的前体和产物是依据翻译后基因组数据库，和蛋白水解酶的特异性剪切位点推导而来。去美国看病服务机构爱诺美康介绍到，实验值与数据库中肽段的理论值进行匹配，在蛋白和多肽的检测匹配中有多种算法，并提供可信度。

一些被认为用于鉴定每种蛋白和多肽可信度的参数，包括匹配准确性、肽序列对应特定蛋白的单一性、重叠的或更长的肽序列以及肽序列，在一个样本中被识别到的次数。基于定量质谱的蛋白组学全面识别，并定量蛋白质以及靶向识别，是质谱蛋白组学的重要内容。去美国看病后，全面定量蛋白质水平，可以通过稳定同位素标记的蛋白质/多肽，使用重肽段作为标准，及非标记定量技术来获得。

去美国看病服务机构爱诺美康介绍到，同位素标记，可以通过代谢法即体内标记、化学法或者酶学法即体外标记。体内定量细胞培养氨基酸稳定同位素（SILAC），是一种体内技术，代谢法标记两种不同细胞群，培养基中缺乏 自然状态的氨基酸。细胞在有稳定同位素标记的氨基酸，重精氨酸、赖氨酸、亮氨酸或异亮氨酸的培养基中培养6〜7代。

两个细胞群，在代谢中分别将“轻”和“重”的同位素整合到细胞蛋白中，此后将两种细胞以1：1的比例混合，再进行蛋白水解并进行质谱分析。每个样本中相应的肽链通过液相色谱共洗脱，并通过对应配对的肽/蛋白质中“轻”与“重”，同位素比值进行相对定量。去美国看病后发现，这项技术要求活细胞培养几代，以致无法用于临床。