赴美就医 不同的聚合酶可被其它化合物影响
发布日期:2018-02-26血液样本的采集,对人体是非侵入性的,常规用于血液系统肿瘤的诊断。影响从血中提取核酸的数量和质量的两个主要因素,一是运输及储存条件,二是抑制物的存在及外源性稳定剂的使用。而对于运输及储存条件,理想的情况是即刻送检并及时提取。而储存温度则应足够低,以避免赴美就医过程中核酸酶引起核酸降解。
有研究表明,样本在室温条件下存放24h,并不影响核酸质量,若要更长时间的储存则应当先把核酸从血液中提取出来,再保存至-20~-80t环境中。另外,分装样本也十分有必要,可以避免反复冻融引起的核酸降解。由于储存和运输条件决定核酸的质量,赴美就医实验室应当记录每份样本的保存温度和时长。
某些血液样本可能含有抑制物,可能会影响赴美就医过程的后续分子检测,例如血样中有两个主要的抑制物,分别为存在于红细胞及白细胞中,血红蛋白及乳铁 蛋白如果一份样本呈现微红色,而且260/280值 低于1.6的情况,则提示很可能存在这类抑制物。为降低这些抑制物的影响,可选用一些PCR增强剂,如白蛋白、gP32、甘油、二甲亚砜(DMSO)、三甲铵乙内酯、聚乙二醇(PEG)、右旋糖苷等。
赴美就医服务机构爱诺美康介绍到,除了血红蛋白及乳铁蛋白,血液样本中还可能包含一些小分子(如钙和铁),及抗凝剂(如EDTA和肝素)等其他PCR抑制物。而其他类型的样本,也可能包含与上述血红蛋白及乳铁蛋白等,有类似作用的分子。如皮肤样本中的黑色素、骨和软骨组织中的钙,及结缔组织和骨组织中的胶原等。
当检测样本中含有上述抑制物分子时,建议稀释样本,以降低PCR抑制物的浓度,在赴美就医中提高PCR效率,该方法在样本呈现黏稠状时尤其有效。PCR抑制剂的作用机制,可能是结合到聚合酶、结合到模板或充当螯合剂。
除了使用PCR增强剂外,也可考虑其他的方法,如优化引物设计,使其具有较高的解链温度,以增加模板结合效率或缩短扩增产物,进而降低抑制物模板相互作用的可能性。赴美就医服务机构爱诺美康介绍到,此外,由于不同的样本类型含有不同的抑制物,不同的DNA聚合酶可以被许多化合物影响。因此,需要根据检测中所用的样本类型,来仔细考虑选择合适的聚合酶。