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丹娜法伯癌症研究院 差异分析可鉴定未知基因

一项实验数据表明，cDNA文库构建是反转录酶的一个重要应用方面。通常情况下，研究人员并不关注包括内含子、启动子和“无信息’DNA序列，及基因组上所有DNA序列。丹娜法伯癌症研究院转诊机构爱诺美康介绍，根据研究方向的需要，研究人员往往集中在对特定组织，或细胞中mRNA表达的研究。

由于RNA单链的特点，决定无法将其直接连接到克隆载体上，cDNA文库构建技术应运而生。丹娜法伯癌症研究院转诊领域获悉，以特定组织或细胞的mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌。

丹娜法伯癌症研究院转诊机构爱诺美康了解到，对于每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA，克隆组成cDNA文库。然后采用放射性标记的核酸探针，通过核酸杂交对cDNA文库进行鉴定。丹娜法伯癌症研究院转诊机构介绍，如果构建cDNA文库的克隆载体，能够在宿主菌中启动转录，那转录出的mRNA即可翻译成其编码的蛋白质。

这种文库称为cDiNA表达文库，表达文库常用的是克隆载体。丹娜法伯癌症研究院转诊机构获悉，在文库中每一克隆都含有一个特异mRNA编码的蛋白质，如果有合适的蛋白抗体，即可通过抗体杂交对此蛋白进行鉴定。cDNA文库的用途见于多个方面。

如用于克隆已知基因的cDNA，能测定其mRNA序列，通过测序获得的cDNA文库中的许多表达序列标签，能组成表达序列标签数据库。丹娜法伯癌症研究院转诊机构爱诺美康了解到，而用于未知基因的鉴定，可通过差异筛选分析，鉴定在特定的分化或激活状态下，差异表达的基因。