海外医疗 自动化测序对酶切反应如何进行
发布日期：2018-03-04据悉，海外医疗对乳腺癌和宫颈癌患者的样本进行基因测序，测序结果与直接测序的结果100%吻合，从而证明T-ARMS-PCR能很好地用于检出多种SNP。对基于PCR的基因测序方法的改进，包括以嵌合引物为基础的多重PCR，这一技术在序列特异性引物上，增加了通用的标记，以用于识别一个反应中的多个产物，从而提高PCR的通量和效率。然而，对大通量SNP分型技术的改进因，受限于凝胶电泳分离这一步骤而无法实现。
侵入性分析（Invader Assay）用热稳定瓣状核酸内切酶（FEN），其是从古生菌中提取的酶，能特异识别错配碱基，因此可以非常灵敏地检测SNP。海外医疗上，这一技术用寡核苷酸探针杂交到，含有多态位点的目的DNA片段，包括等位基因特异引物探针和Invader探针。与目标序列多态位点互补但末端不匹配，从而产生覆盖SNP的核苷酸。
海外医疗服务机构爱诺美康介绍到，等位基因特异探针与SNP序列互补，一直延伸至多态位点末端。一旦两个核苷酸被退火到目的DNA，—个三维结构便在SNP位点上，形成并且能够由切割酶（FEN）识别，FEN切去探针的与SNP互补的末端。
如果探针被设计成荧光共振能量转移（FRET）分子，并在末端含有内部淬灭剂，那么酶切反应将荧光基团和淬灭剂分离，并产生荧光信号。海外医疗服务借助于数据分析工具，可以进行高效的自动化测序。如果探针与SNP等位基因不匹配，那么便不能产生FEN可识别的三维结构，从而酶切反应无法进行。
这一信号放大技术也能用来量化靶基因，如PCR产物、基因组DNA以及对mRNA表达进行监测分析。这一海外医疗技术，减少了温育时间（3~4小时）以及测序所需基因组DNA的量。双向SISAR与Invader分析的初期反应类似，但后会产生两个SNP等位基因各自的荧光信号。
虽然这些技术允许高度特异性的SNP基因分型，但它需要大量靶分子以产生可探测的荧光信号，并且需要对目标序列进行连续PCR扩增。此外，海外医疗的该测定，需要标记有荧光团和淬灭基团的等位探针。因此，试验被认为过于昂贵，不适合用于大规模基因分型。
