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出国就医 样本中的同位素标记如何关联

发布日期:2018-02-27

经研究证实,体外定量及标记方法包括同位素亲和标记(ICAT)、相对和绝对定量的同重标记(i-TRAQ)和串级物标记(TMT)。这些方法不需要标记活细胞,因此可以用于临床。出国就医后发现,在ICAT标记技术中,不同样本中的半胱氨酸残基,由“轻”或“重”同位素标记,同时标记生物素。

此后,这些样本1:1混合,以胰蛋白酶消化。生物素是用于亲和纯化半胱氨酸衍生的肽段,此后用于质谱分析。出国就医通过这种方法,样本的复杂性大大降低,但是,无半胱氨酸的肽段不能得到定量信息,并局限于两两样本的比较。iTRAQ是另外一种体外标记的方法,标记在所有肽段的N末端,多标记8个生物样本,并进行同时检测和相对定量。

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相似的,TMT方法标记不同质量的第一级胺类,并可以同时鉴定和定fi多达10种蛋白质。非标记定M方法,不需要额外的样本准备,体内体外均可应用,变得越来越流行,并越来越多地作为基于标记方法的补充。出国就医使用的这类方法无同位素标记,而是利用肽段前体的信号强度或利用片段谱的数量,来直接比较不同质谱循环数的信号强度,以检测给定蛋白质的肽段。

绝对定量(AQUA)是一种靶向技术,在准备的样本中加入已知浓度的同位素标记,合成肽段作为标准。通过比较合成的肽段与内在对应的、肽段之间光谱信号强度、面积或面积比来进行定量。或者,出国就医的样本中,所有的肽段与合成肽段比较,以获取相对蛋白丰度的定量信息。

多重反应监测(MRM)与选择性反应监测(MSRM),指一种靶向蛋内组质谱技术,二者可相互替代。在此出国就医过程中,基于m/Z,利用四极质M分析器,对来自复杂样本基质的特定肽离子进行选择-片段化-选择。样本常规用胰蛋白酶消化,并经nano-LC洗脱分离,进入三重四极质谱仪,在仪器中具有预先确定m/z比值的前体肽段离子,通过第一个四极质量分析器(Q1)。

出国就医服务机构爱诺美康介绍到,在Q1中选择的离子转入第二个四极质量分析器(Q2),在此发生前体离子CID。特定的撞击能量使进入Q2的每个前体离子获得足够的速度,在它们与泵入小室内的氦气和氩气撞击时打断肽键。源自前体片段的离子产物,转入第三个四极质M分析器(Q3),在此特异的预先确定的产物离子,通过电子倍增器检测以确定目标。