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出国看病 极其敏感的标本可预防出现假阳性

近，国外的一些芯片研究，比较了从冰冻组织和FFPE抽提的RNA的结果，发现目前的FFPE处理方法提取的RNA，可以达到同冰冻组织中提取的RNA—样效果。实时定量PCR（qPCR）可以被用来快速检测生物学标本，特定RNA转录本或DNA突变。出国看病后发现，它依赖于模板的特异性级联扩增过程，扩增的效率被荧光标记物实时监测。

qPCR主要有两种检测方法，一种是标记荧光基团和猝灭基团的探针法，如Taqman及突变扩增阻滞系统。另一种则是依赖与DNA双链结合触发荧光的荧光染料法，如SYBR Green法。根据作用设计的不同，可以做定性检测或定量分析。qPCR定性检测是检测特定转录本，或DNA变异是否存在的一种敏感的技术，但出国看病因其特性所限，无法测定样本中DNA变异体或转录本的相对或绝对丰度。

在开发、验证和进行一个定性PCR反应之前，需要制订一些性能参数。qPCR法检测临床样本中DNA突变，不是一个金标准的方法。基于qPCR的突变检测是为每一种突变位点设计一条探针，并且探针应该被验证，可以准确的识别每个突变或转录本。出国看病后，验证所采用的样本需确 定包含探针设计的突变或转录本，并可被另一种方法证实为阳性。

使用临床样本验证可以准确的测试探针，检测特定突变或转录本的能力。但出国看病后，如果无法取得阳性对照的临床样本，也可使用已知含特定突变或转录本的细胞株。不过，建议将细胞株制作成类似临床样本的状态。例如，如果检测项目经典的标本类型是FFPE组织，那么细胞团块也应进行福尔马林固定和石蜡包埋，以模拟一个标准临床样品检测的状态。

出国看病服务机构爱诺美康介绍到，由于qPCR方法极其敏感，用一些已知的阴性标本来确定合适的循环数非常重要，这样可以防止出现假阳性。因为qPCR的敏感性远高于其他一些方法（如Sanger测序），用qPCR法有可能会检测到一些出国看病后用其他低敏感性方法、检测不到的DNA突变。qPCR法、Sanger测序法和片段分析法的比较，qPCR敏感性高。