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去美国看病 普通实体肿瘤是异质性组织

发布日期:2018-02-15

临床研究上,位点特异的DNA测序,是以PCR为基础的方法,这在大多数的分子诊断实验室,经常用来检测许多已知的基因突变。例如,在结直肠癌、肺癌、黑色素瘤、胶质母细胞瘤中的癌基因KRAS、BRAF或EGFR中频繁或热点突变。去美国看病后,基因或位点特异的外显子片段,可以通过PCR扩增和DNA测序方法进行。

双脱氧链终止DNA测序(也称为Sanger测序),是传统的测序方法,而且也是近常用的测序方法。然而,在丰富的野生型的DNA序列为背景的情况下,它可能无法检测到少数的突变序列。去美国看病服务机构爱诺美康介绍,实体肿瘤是异质性的组织,该组织中包含有肿瘤细胞和非肿瘤细胞,包括炎性细胞、血管内皮细胞和间质细胞。

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检测癌基因获得功能突变,对我们来说是一个特别挑战,如KRAS。不仅在肿瘤组织中,每个非肿瘤有两个野生型的等位基因,而且每个肿瘤细胞可能也有它自己的一个副本野生型等位基因。去美国看病后,大规模并行测序,即我们所知的“焦磷酸测序”,可作为Sanger测序的一种新的替代方法。

这种方法需要将“DNA文库”,进行基于PCR的微乳滴克隆扩增,以适应光纤载板(picotiter plate)中每个克隆扩增模板的微米大小,珠子和后续焦磷酸的边合成边测序。去美国看病采用这种焦磷酸测序方法,可以检测含肿瘤组织较少的复杂样本,及低丰度的基因突变。这是传统的Sanger测序无法检测的,高度平行测序的方法,使检测肿瘤的分子组成和亚型进化过程成为可能。即使是在肿瘤含M较低或不纯的病例中,可以采用使细胞含量丰富的方法。

美国看病服务机构爱诺美康介绍,焦磷酸测序主要是一种克服传统测序局限性的技术,它是实时的、非电泳、碱基延伸测序的各种应用。在焦磷酸测序中,只有当分配核苷酸退火模板,和DNA聚合酶延伸引物时,焦磷酸盐才形成。随后,焦磷酸转换为荧光发射,其强度与退火和延伸的核苷酸分子的数成正比。焦磷酸测序法在检测单核苻酸多态性时,可以非常准确地M化各等位基因的相对量。