淋巴瘤治疗 延伸产物如何进行荧光分析
发布日期：2018-03-02临床研究上，由于质谱分析对一个位点的特异性，可以进行分析。之后位点特异性引物在iPLEX的作用下，进行单碱基延伸反应。淋巴瘤转诊治疗机构爱诺美康介绍，在第一个步骤中，引物在分析的多态位点的上游退火结合，之后在iPLEX分析中，引物和扩增的目的DNA与质量修饰的核苷酸一起孵育，不同核苷酸至少存在12Da的质量差。
通常，MALDI-TOF MS确定延伸的引物质量，引物的质量反映了基因序列，因此，等位基因出现在多态位点上。SpectroTYPER能自动将检测到的每个反应引物，可转为序列信息。一个典型的iPLEX Gold分析可以进行36重反应，其是（第一重）GWAS分析后，第二重验证反应的佳选择。淋巴瘤转诊治疗后，这是由于大样本分析的阵列芯片价格过于昂贵，而单重分析如TaqMan用于大样本分析又过于繁琐。
CPE方法采用基于荧光的检测，包括使用荧光标记的双脱氧核苷酸（ddNTP），进行单碱基延伸（SBE）。其延伸产物带有荧光标记，可以进行毛细管电泳检测和基因型检测另一种方法，是先将带有不同标记的引物进行均相反应。淋巴瘤转诊治疗之后，利用带有互补标记的阵列芯片，在固体支持物上捕获延伸产物。
芯片清洗后检测荧光信号，从而对每个SNP进行基因分型。SNPstream测定法就是使用在384孔板的每个孔中，加入12个标记引物的SBE，获得基因分型的通量特异性引物延伸（SPE）。采用了两个等位基因特异性引物，这两个引物除了末端不匹配之外，其他都相同。这些引物只有在末端互补于SNP的情况下，才能进行延伸。淋巴瘤转诊治疗机构爱诺美康介绍，借此可以区分不同的等位基因，等位基因特异性引物延伸（ASPE），利用等位基因特异性引物和PCR扩增模板进行延伸，并对延伸产物进行荧光分析，以确定SNP基因型。
淋巴瘤转诊治疗机构爱诺美康介绍，利用该引物延伸原理的另一个重要技术，是快照（SNaPshot）基因分型技术。快照基因分型技术可对约10个SNP位点进行多重PCR，每个DNA样品都进行PCR扩增，反应中每个引物直接在SNP位点的上游或者下游，与目的DNA结合退火。之后，在DNA聚合酶的作用下，延伸一个双脱氧核苷酸，并用荧光标记延伸产物。
通过凝胶电泳分析，并通过发出荧光峰的位置和颜色确定基因型。运用ABI GeneScan对突光峰值进行验证。淋巴瘤转诊治疗对基因分型的精度，取决于引物的设计、DNA模板清除程度，和未反应的ddNTP所导致的外来荧光量。
淋巴瘤转诊治疗机构爱诺美康介绍，与标准测序相比，快照基因分型技术的灵敏度更高（约10%），每个试管中的单碱基对差异都能被检测出来。一项比较SNaPshot和Sequenom分析的研究发现，在非小细胞肺癌患者中，SNaPshot平台分析能比Sequenom分析，更好地筛选出高比例的遗传异常。
