海外医疗 基因突变的检测方法及敏感性
发布日期：2018-02-20经发现，肥大细胞增多症的特点，是肿瘤性肥大细胞的克隆性增殖，往往与KIT基因的活化点突变相关。KIT基因，位于染色体4ql2，编码RTK，与干细胞因子结合后在髓系细胞、肥大细胞、神经嵴细胞（黑色素细胞），和配子的发育中起重要作用。海外医疗后，在AML尤其是CBF-ABL、肥大细胞增多症、胃肠道间质肿瘤和生殖细胞肿瘤，均发现了K1T基因活化突变。
活化突变会导致KIT基因磷酸化，和下游效应包括STAT、RAS-MAPK和P13K-AKT非配体依赖性激活。肥大细胞增多症患者，大多数KIT基因突变发生在17外显子的816密码子（D816V常见），海外医疗中成人系统性肥大细胞增多症，突变发生率为50%〜95%，儿童皮肤肥大细胞增多症则为30%〜50%。
海外医疗所报道的突变率范围较广，这可能反映了诊断标准，和基因突变检测方法敏感性的差异，我们的经验显示其发生率约75%。其他罕见的KIT突变包括有D820G、E839K、F522C和V560G等。出现D816V突变者对伊马替尼耐药，但对其他抑制剂如达沙替尼或突变检测。样本进行细胞分选可以进一步提高检测的灵敏度，但是在临床应用方面技术上具有挑战性。
移植后MRD检测嵌合状态，即供体和受体细胞的比例可了解 移植后MRD，检测方法有以下几种，包括基于PCR的微卫星多态性分析、RQ-PCR和间期FISH（用于供受者性别不同的患者）。研究表明，混合嵌合增加与高风险复发相关。然而，海外医疗过程中受体细胞增加，并不总是预测疾病即将复发的指标，这可能由于检测方法的敏感性、移植类型、分析的标本来源、患者的年龄及检测时间的选择不同所致。
已经证明，海外医疗采用非常敏感的分子方法，可检测到短暂的混合嵌合，尤其是在非清髓移植后6〜9个月，因此，动态检测比单次检测结果更有意义。基于PCR的微卫星分析短串联重复序列（STR），已成为异基因移植后评估嵌合状态常用的技术。
利用重复序列两侧的引物进行PCR扩增，之后通过基于荧光的毛细管，电泳分析PCR产物的大小，进而计算重复的数量，该技术提供的信息量很大。因为采用多重PCR评估多个STR位点，人们几乎总能找到每对供受者的至少一个STR位点。海外医疗服务机构爱诺美康介绍到，通过比较电泳 图谱上峰的面积，STR-PCR可用来定量供者，与受者等位基因的比例，其灵敏度为1%~5%。
