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肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法

TIL（Tumorinfiltratinglymphocytes）细胞疗法，指肿瘤浸润的淋巴细胞，是由免疫界泰斗Steven A. Rosenberg及其团队开创的，Rosenberg是世界著名的癌症学和免疫学专家，也是美国国立癌症研究院（NCI）的外科主任。他在1988年首次证明使用自体TIL的过继性T细胞疗法可以介导转移性恶性黑色素瘤患者的肿瘤消退。

Steven A. Rosenberg

在癌症的早期阶段，免疫系统试图通过动员淋巴细胞的特殊免疫细胞来攻击肿瘤。在手术切除的肿瘤组织中，我们发现大部分是肿瘤细胞，也有少部分淋巴细胞。这些淋巴细胞中有部分是针对肿瘤特异性突变抗原的T细胞，Rosenberg博士认为它们是深入到肿瘤内部打击能力最强的免疫细胞，但是由于一些原因(比如肿瘤微环境和PD-1)，这部分淋巴细胞的功能受到了抑制，不能在肿瘤组织中有效的杀伤肿瘤细胞。

但是，科学家可以通过一些体外培养方法把这些肿瘤组织中的某类型的淋巴细胞富集起来，再回输给患者，就能够发挥抗肿瘤作用，而且联合PD-1效果会更好。TILs一旦增长到数十亿个，就被注入患者体内，在那里他们攻击癌细胞，而不损伤健康细胞。在TIL输注之前，患者要接受化疗以帮助TIL攻击肿瘤。

Steven A.Rosenberg获得2020年美国癌症研究协会（AACR）和癌症研究所（CRI）颁发的癌症免疫学奖。右为诺贝尔医学奖获得者JamesAllison教授。

2011年，Steven A.Rosenberg团队发表在国际顶级期刊《Clinical cancer research》上的对于转移性黑色素瘤的2期临床研究显示，TIL治疗黑色素瘤患者的客观缓解率（ORR）为56％，完全缓解率（CR）高达24％；浸润肿瘤的免疫细胞数量与患者的生存机会成正比。

2019年，FDA授予肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）治疗方法LN-145为突破性疗法认定。

Michal Lotem教授

Michal Lotem教授是全球免疫疗法和细胞疗法领域的前沿科学家，以色列卫生部首席科学家。Lotem教授早年在美国国家癌症中心工作，师从于世界免疫疗法先驱Steven A Rosenberg教授，并共同开展著名的TIL疗法的研究工作。Lotem教授在2004年回到以色列，并将TIL疗法带到以色列开展进一步的临床研究工作。接着，她又研发出了一种新一代的个体化黑色素瘤疫苗。在过去的十几年里，Lotem教授用她研发的全球首个个体化疫苗免疫疗法，治疗了无数从世界各地转诊来的晚期黑色素瘤患者。并且研发出改良同种异体疫苗，用于结直肠癌、乳腺癌等其他癌症患者。

这种疗法基于其极高的成功率和安全性，已经被以色列卫生部正式批准用于临床治疗，以色列哈达萨医院也是目前全球仅有的一家可以执行这种疫苗免疫疗法的医院。

TIL疗法的特殊之处

1. 杀伤能力更强

TIL的免疫细胞来自于肿瘤组织，而其他细胞免疫疗法大部分来取自血液，这直接决定了免疫细胞识别肿瘤的能力。据估计，肿瘤里分离出的免疫细胞，有60%以上能识别肿瘤，而血液里面分离的免疫细胞，不到0.5%。

2. 根据特定突变，精准识别

这种新型的疗法不是像传统的简单的扩增回输，而是要确定患者病例中特定的突变。之后利用突变信息找到能够最有效瞄准这些突变的T细胞，最后提取出专门患者肿瘤中细胞突变的T细胞，这些细胞具有精准识别癌细胞的能力。

Rosenberg对常见胃肠道癌的患者的研究证明了不同患者之间免疫应答的独特性。通过对75位患者的生物学样本进行全外显子测序，确定了124个新抗原的TIL。他们发现，99%的新抗原决定簇在每个癌症患者中都是完全不同的。因此，必须从每个癌症患者中取出细胞，确定哪些细胞可以真正识别和攻击癌症，将这些细胞进行培养，扩增才能起到治疗效果。

3. 扩增量大

TILs细胞经过分离筛选后，会加入白细胞介素2进行培养，增加免疫细胞存活的几率，最大限度的扩增免疫细胞，达到数百亿~数千亿级别，确保T细胞的有效性和活性后重新注入到患者体内。而CAR T疗法扩增通常不超过1亿。

TIL疗法治疗过程

第一步：取得

通过手术，取得患者的肿瘤组织，其中混杂着肿瘤细胞以及T淋巴细胞；

第二步：分离淋巴细胞

肿瘤组织样本被运送到专有的GMP设施，在那里TIL被分离并繁殖，将不同种类的T淋巴细胞在细胞板上克隆化，并加入高浓度的IL-2来选择培养，在3周内产生数十亿TIL；在IL-2的刺激下不同种类的T淋巴细胞都得到了克隆扩增，形成了细胞群；

第三步：鉴定分离

用患者的肿瘤细胞和扩增后的T淋巴细胞反应，凡是能够发生杀瘤效应的T淋巴细胞群作为阳性TIL群留下，其余的丢弃；

第五步：扩增TIL

用负载了肿瘤特异性抗原的树突状细胞（DC）进一步扩增培养肿瘤特异性的TIL；

第六步：输入体内

患者开始1周的预处理治疗（清髓）以准备接受TIL。在TIL输注后立即接受多达6剂IL-2，来支持患者体内TIL的生长和激活。从肿瘤提取到TIL输注的时间是6-8周。

实体瘤疗效数据

1 结直肠癌

在2016年发表的文献中，Rosenberg和其他研究人员合作，使用这种方法成功治疗转移性结直肠癌患者。

KRAS G12D突变的结直肠癌患者经过TIL治疗后，患者肺部的7个转移灶中6个病灶消失殆尽，其中三个完全消失，患者在4年后仍然没有疾病进展。

2 宫颈癌

TIL治疗晚期宫颈癌患者，客观缓解率（ORR）44%，完全缓解率（CR）11%，疾病控制率（DCR）高达85%。

3 肺癌

一项由美国Moffitt癌症中心开展的基于TIL细胞治疗的Ⅰ期临床结果显示：在12名可评估的非小细胞肺癌患者中，TIL疗法可达到25%的总缓解率，其中2名患者达到持久的完全缓解。这些患者都是已经接受过PD-1（Opdivo）治疗后病情进展的晚期患者。

4 乳腺癌

2018年，《NatureMedicine》上发表的一份报告描述了在用对4种突变蛋白（SLC3A2，KIAA0368，CADPS2和CTSB）的TILs治疗的患者中成功治疗化学难治性激素阳性转移性乳腺癌。反应已经持续进行了22个月以上，并且患者在4年后仍然没有疾病。

5 黑色素瘤

C-144-01是一项2期临床试验，招募已被诊断患有IIIc期或IV期转移性黑色素瘤的患者。患者之前接受至少一次全身治疗，其中还有66名接受过PD-1抑制剂治疗的患者，CTLA-4抑制剂的 80人，BRAF / MEK抑制剂组合的23人。结果显示：疾病控制率（DCR）高达80％；

客观缓解率达到38%，包括2例（3％）完全缓解，23例部分缓解（35％）和28例（42％）病情稳定；中位随访时间为8.8个月，未达到中位反应持续时间。

同时，患有PD-L1阴性的患者也有响应，这说明对免疫检查点抑制剂无效的患者仍能获益于TIL疗法。

以色列哈达萨医院（HadassahMedical Center），1912年成立，位于耶路撒冷，拥有两个院区（Ein Kerem院区和Mount Scopus院区），是集医疗、科研、培训多种功能为一身的世界著名医疗机构，是以色列的国家转诊目标医院，以治疗复杂、棘手的病例而享有盛誉，共有2300名医护人员，800张床位，是接待外国元首和政府首脑就诊的指定医院。2005年曾因救治巴勒斯坦伤病员、促进以巴和平而获得诺贝尔和平奖提名；另外，以色列前总理沙龙昏迷期间曾在这里进行为期三年的疗养。以色列超过一半的医学研究是在Hadassah完成的，每个部门结合研究单位还有很多跨学科研究中心。